Нейроны головного мозга взрослых нуждаются в постоянной экспрессии гена риска шизофрении Tcf4 для структурной и функциональной целостности
1. Kratsios P, Stolfi A, Levine M, Hobert O. Координированная регуляция признаков холинергических двигательных нейронов посредством консервативного терминального селекторного гена. Нат Нейроски. 2012;15:205–14. doi: 10.1038/nn.2989. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
2. Etchberger JF, Flowers EB, Poole RJ, Bashllari E, Hobert O. Цис-регуляторные механизмы спецификации левого/правого асимметричного нейрона-подтипа в C. Элеганс. Разработка. 2009 г.;136:147–60. doi: 10.1242/dev.030064. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
3. Liu C, Maejima T, Wyler SC, Casadesus G, Herlitze S, Deneris ES. Pet-1 необходим на разных этапах жизни для регуляции серотонинергической функции. Нат Нейроски. 2010;13:1190–8. doi: 10.1038/nn.2623. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
4.
Kadkhodaei B, Alvarsson A, Schintu N, Ramsköld D, Volakakis N, Joodmardi E, et al. Фактор транскрипции Nurr1 поддерживает целостность волокон и экспрессию митохондриальных генов, кодируемых ядром, в дофаминовых нейронах. Proc Natl Acad Sci USA. 2013;110:2360–5. doi: 10.1073/pnas.1221077110. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
5. Яп Э.Л., Гринберг М.Е. Транскрипция, регулируемая активностью: преодоление разрыва между нейронной активностью и поведением. Нейрон. 2018;100:330–48. doi: 10.1016/j.neuron.2018.10.013. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
6. Stefansson H, Ophoff RA, Steinberg S, Andreassen OA, Cichon S, Rujescu D, et al. Распространенные варианты, связанные с риском шизофрении. Природа. 2009; 460:744–7. doi: 10.1038/nature08186. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
7. Рабочая группа по шизофрении психиатрической геномики C. Биологические выводы из 108 связанных с шизофренией генетических локусов.
Природа. 2014; 511:421–7. doi: 10.1038/nature13595. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
8. O’donnell L, Soileau B, Heard P, Carter E, Sebold C, Gelfond J, et al. Генетические детерминанты аутизма у лиц с делецией 18q. Хам Жене. 2010; 128:155–64. doi: 10.1007/s00439-010-0839-y. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
9. Phan BN, Bohlen JF, Davis BA, Ye Z, Chen HY, Mayfield B, et al. Транскриптомный профиль, связанный с миелином, является общим для моделей синдрома Питта-Хопкинса и расстройства спектра аутизма человека. Нат Нейроски. 2020; 23: 375–85. doi: 10.1038/s41593-019-0578-x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
10. Williams HJ, Craddock N, Russo G, Hamshere ML, Moskvina V, Dwyer S, et al. Большинство значимых для всего генома локусов предрасположенности к шизофрении и биполярному расстройству, о которых сообщалось, на сегодняшний день выходят за рамки традиционных диагностических границ. Хум Мол Жене. 2011; 20: 387–91.
doi: 10.1093/hmg/ddq471. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
11. Amiel J, Rio M, de Pontual L, Redon R, Malan V, Boddaert N, et al. Мутации в TCF4, кодирующем основной фактор транскрипции спираль-петля-спираль класса I, ответственны за синдром Питта-Хопкинса, тяжелую эпилептическую энцефалопатию, связанную с вегетативной дисфункцией. Am J Hum Genet. 2007; 80: 988–93. дои: 10.1086/515582. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
12. Zweier C, Peippo MM, Hoyer J, Sousa S, Bottani A, Clayton-Smith J, et al. Гаплонедостаточность TCF4 вызывает синдромальную умственную отсталость с перемежающейся гипервентиляцией (синдром Питта-Хопкинса) Am J Hum Genet. 2007;80:994–1001. дои: 10.1086/515583. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
13. Brockschmidt A, Todt U, Ryu S, Hoischen A, Landwehr C, Birnbaum S, et al. Тяжелая умственная отсталость с нарушениями дыхания (синдром Питта-Хопкинса) обусловлена гаплонедостаточностью нейронального фактора транскрипции bHLH TCF4.
Хум Мол Жене. 2007; 16:1488–94. doi: 10.1093/hmg/ddm099. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
14. Maduro V, Pusey BN, Cherukuri PF, Atkins P, du Souich C, Rupps R, et al. Сложная транслокация, нарушающая TCF4 и изменяющая экспрессию изоформы TCF4, сегрегирует как легкую аутосомно-доминантную умственную отсталость. Orphanet J Rare Dis. 2016; 11:1–15. doi: 10.1186/s13023-016-0439-6. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
15. Chen T, Wu Q, Zhang Y, Lu T, Yue W, Zhang D. Tcf4 контролирует миграцию нейронов коры головного мозга посредством регуляции Bmp7. Фронт Мол Невроски. 2016; 9:1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
16. Месман С., Баккер Р., Смидт М.П. Tcf4 необходим для правильного развития мозга во время эмбриогенеза. Мол Селл Нейроски. 2020;106:103502. doi: 10.1016/j.mcn.2020.103502. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
17. Schoof M, Hellwig M, Harrison L, Holdhof D, Lauffer MC, Niesen J, et al. Основной фактор транскрипции спираль-петля-спираль TCF4 влияет на архитектуру мозга, а также на морфологию и дифференцировку нейронов.
Евр Джей Нейроски. 2020;51:2219–35. doi: 10.1111/ejn.14674. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
18. Li H, Zhu Y, Morozov YM, Chen X, Page SC, Rannals MD, et al. Нарушение регуляторных сетей TCF4 приводит к аномальному развитию коры головного мозга и психическим расстройствам. Мол Психиатрия. 2019;24:1235–46. doi: 10.1038/s41380-019-0353-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
19. Rannals MD, Hamersky GR, Page SC, Campbell MN, Briley A, Gallo RA, et al. Фактор транскрипции 4 гена психиатрического риска регулирует внутреннюю возбудимость префронтальных нейронов посредством репрессии SCN10a и KCNQ1. Нейрон. 2016;90:43–55. doi: 10.1016/j.neuron.2016.02.021. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
20. Page SC, Hamersky GR, Gallo RA, Rannals MD, Calcaterra NE, Campbell MN, et al. Ген транскрипции 4, связанный с шизофренией и аутизмом, регулирует столбчатое распределение префронтальных пирамидных нейронов слоя 2/3 зависимым от активности образом.
Мол Психиатрия. 2018;23:304–15. doi: 10.1038/mp.2017.37. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
21. Sepp M, Kannike K, Eesmaa A, Urb M, Timmusk T. Функциональное разнообразие изоформ TCF4 основного фактора транскрипции спираль-петля-спираль человека, генерируемое за счет альтернативного использования 5′-экзона и сплайсинга. ПЛОС ОДИН. 2011;6:6. doi: 10.1371/journal.pone.0022138. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
22. Flora A, Garcia JJ, Thaller C, Zoghbi HY. E-белок Tcf4 взаимодействует с Math2, чтобы регулировать дифференцировку специфического подмножества нейрональных предшественников. Proc Natl Acad Sci USA. 2007; 104:15382–7. doi: 10.1073/pnas.0707456104. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
23. Zhuang Y, Cheng P, Weintraub H. Развитие B-лимфоцитов регулируется комбинированной дозой трех основных генов спираль-петля-спираль, E2A, E2-2 и HEB. Мол Селл Биол. 1996; 16: 2898–905. doi: 10.
1128/MCB.16.6.2898. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
24. Kennedy AJ, Rahn EJ, Paulukaitis BS, Savell KE, Kordasiewicz HB, Wang J, et al. Tcf4 регулирует синаптическую пластичность, метилирование ДНК и функцию памяти. Cell Rep. 2016; 16: 2666–85. doi: 10.1016/j.celrep.2016.08.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
25. Jung M, Häberle BM, Tschaikowsky T, Wittmann MT, Balta EA, Stadler VC, et al. Анализ паттерна экспрессии гена риска шизофрении и умственной отсталости TCF4 в развивающемся и взрослом мозге предполагает роль в развитии и пластичности нейронов коры и гиппокампа. Мол Аутизм. 2018;9:20. doi: 10.1186/s13229-018-0200-1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
26. Kim H, Berens NC, Ochandarena NE, Philpot BD. Распределение региона и типа клеток TCF4 в постнатальном мозге мыши. Фронт Нейроанат. 2020; 14:1–19. doi: 10.3389/fnana.2020.00042. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
27.
Sepp M, Vihma H, Nurm K, Urb M, Page SC, Roots K, et al. Фактор транскрипции TCF4, связанный с умственной отсталостью и шизофренией, регулируется активностью нейронов и протеинкиназой A. J Neurosci. 2017;37:10516–27. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1151-17.2017. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
28. Crux S, Herms J, Dorostkar MM. Tcf4 регулирует плотность и морфологию дендритных шипиков во взрослом мозге. ПЛОС ОДИН. 2018;13:2–10. doi: 10.1371/journal.pone.0199359. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
29. Madisen L, Zwingman TA, Sunkin SM, Oh SW, Zariwala HA, Gu H, et al. Надежная и высокопроизводительная система отчетов и характеристик Cre для всего мозга мыши. Нат Нейроски. 2010;13:133–40. doi: 10.1038/nn.2467. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
30. McReynolds JR, Christianson JP, Blacktop JM, Mantsch JR. Что говорит Фос? Использование подходов на основе Fos для понимания вклада стресса в расстройства, связанные с употреблением психоактивных веществ.
Нейробиол стресс. 2018;9: 271–85. doi: 10.1016/j.ynstr.2018.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
31. Bergqvist I, Eriksson M, Saarikettu J, Eriksson B, Corneliussen B, Grundström T, et al. Основной фактор транскрипции спираль-петля-спираль E2-2 участвует в развитии Т-лимфоцитов. Евр Дж Иммунол. 2000;30:2857–63. doi: 10.1002/1521-4141(200010)30:10<2857::AID-IMMU2857>3.0.CO;2-G. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
32. Ghosh HS, Cisse B, Bunin A, Lewis KL, Reizis B. Непрерывная экспрессия фактора транскрипции E2-2 поддерживает клеточную судьбу зрелых плазмоцитоидных дендритных клеток. Иммунитет. 2010;33:905–16. doi: 10.1016/j.immuni.2010.11.023. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
33. Sun Q, Wang X, Zhang C. Распределение экспрессии CaMKIIα в мозге in vivo, изученное на мышах CaMKIIα-GFP. Мозг Res. 2013;1518:9–25. [Бесплатная статья PMC] [PubMed]
34. Feng G, Mellor RH, Bernstein M, Keller-Peck C, Nguyen QT, Wallace M, et al.
Визуализация подмножеств нейронов у трансгенных мышей, экспрессирующих несколько спектральных вариантов GFP. Нейрон. 2000; 28:41–51. дои: 10.1016/S0896-6273(00)00084-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
35. D’rozario M, Zhang T, Waddell EA, Zhang Y, Sahin C, Sharoni M, et al. Бездочерние белки bHLH типа I и Tcf4 ограничивают ветвление нейритов и образование синапсов путем репрессии нейрексина в постмитотических нейронах. Cell Rep. 2016; 15: 386–97. doi: 10.1016/j.celrep.2016.03.034. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
36. Берри К.П., Недиви Э. Динамика позвоночника: все ли они одинаковы? Нейрон. 2017;96:43–55. doi: 10.1016/j.neuron.2017.08.008. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
37. Thaxton C, Kloth AD, Clark EP, Moy SS, Chitwood RA, Philpot BD. Общая патофизиология в нескольких мышиных моделях синдрома Питта-Хопкинса. Дж. Нейроски. 2018; 38: 918–36. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1305-17.2017. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
38.
Schmeisser MJ, Baumann B, Johannsen S, Vindedal GF, Jensen V, Hvalby ØC, et al. IκB киназа/ядерный фактор κB-зависимая экспрессия инсулиноподобного фактора роста 2 (Igf2) регулирует образование синапсов и созревание шипов посредством передачи сигналов рецептора Igf2. Дж. Нейроски. 2012; 32: 5688–703. doi: 10.1523/JNEUROSCI.0111-12.2012. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
39. Terauchi A, Johnson-Venkatesh EM, Bullock B, Lehtinen MK, Umemori H. Передача сигналов ретроградного фактора роста фибробластов 22 (FGF22) регулирует экспрессию инсулиноподобного фактора роста 2 (IGF2) для зависимой от активности стабилизации синапсов у млекопитающих. мозг. Элиф. 2016; 5:1–28. doi: 10.7554/eLife.12151. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
40. Khan S, et al. IGFBP2 играет важную роль в когнитивном развитии в раннем возрасте. Adv Sci. 2019;6:1
41. Саркисян М.Р., Гвадиана С.М. Влияние первичных ресничек на морфогенез коры и созревание подтипа нейронов.
Нейробиолог. 2015;21:136–51. doi: 10.1177/1073858414531074. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
42. Kumamoto N, Gu Y, Wang J, Janoschka S, Takemaru K, Levine J, et al. Роль первичных ресничек в глутаматергической синаптической интеграции взрослых нейронов. Нат Нейроски. 2012;15:399–405. doi: 10.1038/nn.3042. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
43. Rhee S, Kirschen GW, Gu Y, Ge S. Истощение первичных ресничек из зрелых зубчатых гранулярных клеток ухудшает зависящую от гиппокампа контекстуальную память. Научный доклад 2016; 6: 1–10. doi: 10.1038/s41598-016-0001-8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
44. Tailby C, Wright LL, Metha AB, Calford MB. Зависимое от активности поддержание и рост дендритов во взрослой коре. Proc Natl Acad Sci USA. 2005; 102:4631–6. doi: 10.1073/pnas.0402747102. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
45. Buell S, Coleman P. Рост дендритов в старческом человеческом мозге и нарушение роста при старческом слабоумии.
Наука. 1979; 206: 854–6. doi: 10.1126/science.493989. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
46. DeVoogd T, Nottebohm F. Половые гормоны вызывают рост дендритов в мозге взрослых птиц. Наука. 1981; 214: 202–4. doi: 10.1126/science.7280692. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
47. Dickstein DL, Kabaso D, Rocher AB, Luebke JI, Wearne SL, Hof PR. Изменения структурной сложности головного мозга в возрасте. Стареющая клетка. 2007; 6: 275–84. дои: 10.1111/j.1474-9726.2007.00289.х. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
48. Vuillermot S, Joodmardi E, Perlmann T, Ove Ögren S, Feldon J, Meyer U. Поведение, связанное с шизофренией, в генетической мышиной модели конститутивного Nurr1 дефицит. Гены, поведение мозга. 2011; 10: 589–603. doi: 10.1111/j.1601-183X.2011.00698.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
49. Han S, Tai C, Westenbroek RE, Yu FH, Cheah CS, Potter GB, et al. Поведение, подобное аутистическому, у мышей Scn1a + — и спасение за счет усиленной ГАМК-опосредованной нейротрансмиссии.
Природа. 2012;489: 385–90. doi: 10.1038/nature11356. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
50. Babicki S, Arndt D, Marcu A, Liang Y, Grant JR, Maciejewski A, et al. Heatmapper: онлайн-картирование тепла для всех. Нуклеиновые Кислоты Res. 2016;44:W147–53. doi: 10.1093/nar/gkw419. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
51. Zhou Y, et al. Metascape предоставляет ориентированный на биологов ресурс для анализа наборов данных системного уровня. Нац коммун. 2019;10, 10.1038/с41467-019-09234-6. [PMC бесплатная статья] [PubMed]
Многовариантные модели послеоперационного делирия у кардиохирургических пациентов: протеомный и демографический вклад , Посмотреть профиль ORCIDShanker A, Gu X, Jung Y, Посмотреть профиль ORCIDNgo LH, Посмотреть профиль ORCIDMarcantonio ER, Посмотреть профиль ORCIDLibermann TA, Посмотреть профиль ORCIDSubramaniam B
doi: https://doi.org/10.1101/2023.05.30.23289741
- Резюме
- Полный текст
- Информация/История
- Показатели 9 0111 Дополнительный материал
РЕЗЮМЕ
Справочная информация: Делирий после операции на сердце является распространенным, болезненным и дорогостоящим явлением, но его можно предотвратить с помощью стратификации риска и целенаправленного вмешательства.
Предоперационные белковые сигнатуры могут выявить пациентов с повышенным риском ухудшения послеоперационных исходов, включая делирий. В этом исследовании мы стремились идентифицировать биомаркеры белков плазмы и разработать прогностическую модель послеоперационного делирия у пожилых пациентов, перенесших операцию на сердце, а также выявить возможные патофизиологические механизмы. Методы: SOMAscan анализ 1305 белков в плазме 57 пожилых людей, перенесших операцию на сердце, требующую искусственного кровообращения, был проведен для определения характерных для делирия белковых сигнатур на исходном уровне (PREOP) и на 2-й день после операции (POD2). Выбранные белки были проверены у 115 пациентов с использованием платформы мультиплексного иммуноанализа ELLA. Белки были объединены с клиническими и демографическими переменными для построения многовариантных моделей, которые оценивают риск послеоперационного бреда и проливают свет на лежащую в его основе патофизиологию. Результаты: В общей сложности 666 белков по данным анализа SOMAscan были обнаружены измененными между PREOP и POD2 (Benjamini-Hochberg (BH)-p<0,01).
Используя эти результаты и результаты других исследований, для мультиплексной проверки ELLA были отобраны 12 биомаркеров-кандидатов (изменение кратности Тьюки (|tFC|)>1,4). Восемь белков были значительно изменены при ПРЕДОП и семь белков во время ПОД2 (p<0,05) у пациентов, у которых развился послеоперационный делирий, по сравнению с пациентами без делирия. Статистический анализ подгонки модели привел к выбору комбинации возраста, пола и различных панелей биомаркеров из 3 белков, сильно коррелирующих с делирием при ПРЕДОП (ангиопоэтин-2, ANGPT2; хемокин 5 с мотивом CC, CCL5; и ингибитор металлопротеиназы 1, TIMP1; AUC =0,829) и POD2 (липокалин-2, LCN2; легкая цепь нейрофиламента, NFL и CCL5; AUC=0,845). Ассоциированные с делирием белки, идентифицированные как кандидаты в биомаркеры, связаны с воспалением, глиальной дисфункцией, васкуляризацией и гемостазом, подчеркивая многофакторную патофизиологию делирия. Заключение: В нашем исследовании предложены две модели послеоперационного делирия, которые включают сочетание пожилого возраста, женского пола и измененных уровней белков как до операции, так и после операции.
Наши результаты подтверждают выявление пациентов с более высоким риском развития послеоперационного делирия после операции на сердце и дают представление о лежащей в основе патофизиологии. ClinicalTrials.gov (NCT02546765).
КЛИНИЧЕСКИЕ ПЕРСПЕКТИВЫ
Комплексный протеомный скрининг пациентов, перенесших операции на сердце, и его связь с развитием послеоперационного бреда.
Мы предлагаем две разные многопараметрические модели: первая модель вводит информацию о факторах риска развития послеоперационного бреда после операции на сердце, которую можно использовать клинически для предоперационного прогнозирования пациентов с более высоким риском; а вторая модель информирует о послеоперационных протеомных сигнатурах, которые проливают свет на патофизиологию делирия и основные механизмы для дальнейшего исследования.
Заявление о конкурирующих интересах
Д-р Субраманиам и д-р Маркантонио сообщили о получении грантовой поддержки от Mallinckrodt Pharmaceuticals во время проведения испытания DexAcet.
доктора Субраманиам и Маркантонио в настоящее время финансируются NIH-R01AG065554. Доктор Маркантонио и доктор Либерманн финансируются NIH R01-AG051658 и P01-AG031720. Доктор Маркантонио также финансируется NIH K24-AG035075. Mallinckrodt Pharmaceuticals не участвовала в разработке и проведении исследования; сбор, управление, анализ и интерпретация данных; подготовка, рецензирование или утверждение рукописи; или решение представить рукопись для публикации. Авторы имели исключительное право на данные, анализ, описание и представление.
Клинические испытания
NCT02546765
Заявление о финансировании
Исследование частично финансировалось компанией Mallinckrodt Pharmaceuticals для проведения анализа SOMAscan.
Декларации авторов
Я подтверждаю, что соблюдены все соответствующие этические нормы и получены все необходимые разрешения IRB и/или комитета по этике.
Да
Подробная информация о IRB/надзорном органе, предоставившем разрешение или освобождение для описанного исследования, приведена ниже:
Комитет по клиническим исследованиям — Институциональный наблюдательный совет Медицинского центра Бет Исраэль Диаконисс (BIDMC; Бостон, Массачусетс) дал этическое одобрение для этой работы.
(Протокол CCI-IRB № 2019 P00075).
Я подтверждаю, что все необходимое согласие пациента/участника было получено и соответствующие институциональные формы были заархивированы, и что любые включенные идентификаторы пациента/участника/образца не были известны никому (например, персоналу больницы, пациентам или самим участникам) за пределами поэтому исследовательская группа не может быть использована для идентификации отдельных лиц.
Да
Я понимаю, что все клинические испытания и любые другие проспективные интервенционные исследования должны быть зарегистрированы в утвержденном ICMJE реестре, таком как ClinicalTrials.gov. Я подтверждаю, что любое такое исследование, указанное в рукописи, было зарегистрировано, и предоставлен идентификатор регистрации исследования (примечание: если публикуется проспективное исследование, зарегистрированное ретроспективно, укажите в поле идентификатора исследования заявление, объясняющее, почему исследование не было зарегистрировано заранее) .
